<%@LANGUAGE="VBSCRIPT" CODEPAGE="936"%> 实时定量PCR服务 - 麦约尔生物
   

 
 
 



 
 
  Western blot 细胞活力增殖 多因子检测 Luminex ELISA

实验服务 -
实时定量PCR (qPCR) 服务

技术原理
Real-time PCR技术,是指在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号累积实时监测整个PCR进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。利用荧光信号的变化实时检测PCR扩增反应中每一个循环扩增产物量的变化,通过Ct值和标准曲线的分析对起始模板进行定量分析。
实时荧光定量PCR技术具有特异性强,有效解决了PCR污染问题、自动化程度高等特点,做到PCR每循环一次就收集一个数据,建立实时扩增曲线,准确地确定Ct值,从而根据Ct值确定起始DNA拷贝数,做到了真正意义上的DNA定量。


服务流程(含逆转录)
1、RNA的提取
2、DNase I 消化样品RNA 中的DNA
3、RNA琼脂糖凝胶电泳
4、RNA反转录为cDNA
5、引物设计合成、探针设计合成(探针法)

Real-Time PCR引物设计的要求
① Tm=55~65 oC
② GC=30~80%
③ PCR扩增产物长度:引物的产物大小不要太大,一般在80~300 bp之间都可。
④ 引物的退火温度要高,一般要在60oC以上。选择特异性好,扩增效率高的引物。

实时定量PCR反应
  常用的看家基因有β-actin,GAPDH,18S rRNA

扩增曲线和溶解曲线(溶解曲线仅染料法提供)
  溶解曲线全部为单峰表明为特异性扩增,荧光扩增曲线可以分成三个阶段:荧光背景信号阶段,荧光信号指数扩增阶段和平台期。

实验收费

项目名称 项目内容 实验周期 价格
样品RNA抽提 细胞、组织样品RNA抽提 5-7个工作日 60元/样
引物设计与合成 优化引物设计及合成(染料法) 5-7个工作日 1.5元/bp
Taqman探针设计与合成 优化引物/探针设计与合成(探针法) -- 询价
反转录PCR反应 RNA反转成cDNA 5-7个工作日 40元/样
预实验:荧光定量PCR体系优化 确定荧光定量PCR反应条件 5-7个工作日 300元/基因
标准曲线制作 绝对定量 5-7个工作日 PCR产物标准品:300元
质粒为标准品:400元
荧光PCR检测 目的基因检测 5-7个工作日 40元/反应
内参基因检测 5-7个工作日 1个样品100元3个反应
结果分析及实验报告 基因表达情况分析 免费

 
 

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